Zdrowe zioła
Naturalne sposoby na codzienne zdrowie

Mutacje BRCA1 w linii germańskiej u kobiet żydowskich i nieżydowskich z rakiem piersi o wczesnym początku cd

Posted in Uncategorized  by admin
July 1st, 2019

Sekwencja BRCA1 typu dzikiego była 5 GAAACA TGTAA3 (podkreślona). Delecja AT w jednym z dwóch alleli spowodowała przesunięcie w ramce odczytu i przedwczesny kodon stop. Oba allele są tutaj analizowane razem. W nici dodatniej sekwencja nukleotydów czyta się od lewej do prawej. Grot wskazuje miejsce delecji dwóch nukleotydów w jednym allelu i wynikową niezsynchronizowaną sekwencję: na prawo od grotu, dwa nukleotydy są rozpoznawane w każdej pozycji, z odpowiednią redukcją intensywności sygnału każdego z nich. Nomenklatura stosowana do wskazania obecności dwóch nukleotydów w tej samej pozycji jest następująca: R oznacza A + G; W, A + T; S, G + C; K, G + T; i Y, C + T. W przypadku nici minus, sekwencja (przekształcona z antysensownej na sensowne nukleotydy w tej analizie) czyta się od prawej do lewej; grot ponownie wskazuje miejsce heterozygotycznej delecji, a sekwencja po lewej stronie grotu jest niezsynchronizowana. Analiza transkrypcji-translacji białek (PTT) wykrywa przedwcześnie kodony stop w pojedynczej reakcji przez amplifikację fragmentów DNA regionu kodującego, transkrypcję fragmentów do mRNA i translację mRNA w radioznakowane peptydy.16,20 Wyniki PTT na bazie genomowego DNA Analiza 11 egzonu 11 BRCA1 została zgłoszona podczas przygotowywania tego badania21 i podjęliśmy się badania całego regionu kodującego BRCA1 przy użyciu zarówno analizy PTT na bazie mRNA, jak i na podstawie genomowego DNA. BRCA1 zawiera 24 eksony, z których pierwszy nie koduje; ekson 4 składa się z powtarzalnej sekwencji rodziny Alu, która jest pomijana w większości transkryptów; a ekson 11 zawiera 3,5 kb całej sekwencji kodującej 5,6 kb1. Transkrypt genów BRCA1 został zatem podzielony na sześć zachodzących na siebie fragmentów (Figura 1, górny panel): koniec 5 , zawierający eksony od 2 do 10 i koniec 5 . eksonu 11 (aminokwasy od do 265), a koniec 3 , zawierający eksony od 12 do 24 i koniec 3 egzonu 11 (aminokwasy od 1354 do 1864), zamplifikowano jako pojedyncze fragmenty z losowo aktywowanego cDNA. Exon 11 najpierw amplifikowano jako pojedynczy fragment 3,5 kb z genomowego DNA metodą PCR z długim zakresem, z użyciem ExTaq (Takara), a następnie przez nested PCR amplifikacji czterech zachodzących na siebie fragmentów (AP, zawierających aminokwasy 224 do 499, BP, zawierających grupę aminową). kwasy 461 do 749; CP, zawierające aminokwasy 712 do 1056 i DP, zawierające aminokwasy od 1020 do 1366). Oligonukleotyd 5 dla każdego z sześciu fragmentów PCR zawierał miejsce rozpoznawane przez polimerazę T7, sekwencję konsensusową Kozak i kodon start, aby umożliwić transkrypcję i translację niesklonowanych produktów PCR. Analiza niesklonowanych produktów PCR zapewniła, że oba allele BRCA1 będą reprezentowane i zmniejszy możliwość jakiegokolwiek błędu wywołanego przez polimerazę, który może być obecny w pojedynczym produkcie PCR. Jeden mikrogram produktu PCR inkubowano z polimerazą T7 i lizatem króliczej retikulocytów w mieszaninie transkrypcji-translacji (Promega) w obecności znakowanej 35S metioniny (Amersham), a następnie przeprowadzono elektroforezę z 12 procentami i 15 procentami siarczanu dodecylu poliakryloamidowo-sodowego żele. Sekwencja wszystkich zastosowanych starterów i optymalne warunki PCR zostały przesłane do elektronicznej bazy danych Cancer Information Core (adres internetowy: http://www.nchgr.nih.gov/dir/lab_transfer/bic/).
Zautomatyzowane sekwencjonowanie nukleotydów
Sekwencję całego regionu kodującego 5,6 kb BRCA1 określono dla każdej próbki linii zarodkowej zautomatyzowanym sekwencjonowaniem obu nici niesklonowanych produktów PCR przy użyciu znakowanych barwnikiem dideoksy-terminatorów (Applied Biosystems).
[więcej w: eu sokółka, przytulisko u wandy, balmarq ]

Tags: , ,

No Responses to “Mutacje BRCA1 w linii germańskiej u kobiet żydowskich i nieżydowskich z rakiem piersi o wczesnym początku cd”

  1. Mieszko Says:

    [..] Odniesienie w tekscie do usg 4d opole[...]

  2. Zero Charisma Says:

    refundowane przez NFZ

  3. Ksawery Says:

    Article marked with the noticed of: odżywki proactive[...]

  4. Ludwik Says:

    Polska sluzba zdrowia nie jest taka zla

  5. Roadblock Says:

    [..] Cytowany fragment: ortopedia[...]

  6. Kickstart Says:

    Najpierw wizyta u lekarza rodzinnego

Powiązane tematy z artykułem: balmarq eu sokółka przytulisko u wandy